文献类型： 中文期刊

作者： 吕彦茹 ¹ ; 余磊 ¹ ; 赵芳 ² ; 王发合 ³ ; 李杰民 ⁴ ; 梁海秋 ¹ ; 朱萍 ¹ ; 周河治 ¹ ;

作者机构： 1.广西大学生命科学与技术学院

2.河北省邯郸职业技术学院

3.青岛赛特香料有限公司

4.广西农业科学院

关键词： 类芽孢杆菌;胆固醇氧化酶;分离;纯化

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2012 年 43 卷 08 期

页码： 18-21

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持。【方法】将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质。【结果】类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6%,纯化倍数为13.4倍。纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58kDa。将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用LineweaverBurk作图法,测得其Km=3.3×10-5mol/L。薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD。【结论】纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值。