龙眼胚胎F3H基因的cDNA克隆及序列分析

许鸿川; 游向荣; 李燕; 陈清西; 《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：采用IEF/SDS-PAGE双向电泳技术,对'立冬本'龙眼合子胚发育不同时期的蛋白质进行分离,通过MALDI-TOF/TOF鉴定到其中一个上调差异表达的蛋白为黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxy-lase,F3H)。以'立冬本'龙眼胚胎cDNA为模板,采用RT-PCR和RACE技术,获得F3H基因cDNA1404bp全长序列。序列分析表明,F3H基因共编码365个氨基酸,其cDNA序列与柑橘、苹果、棉花等F3H基因的同源性均高达80%以上,该基因在GenBank中登录号为EF468104。

关键词： 龙眼 胚胎 黄烷酮-3-羟化酶 基因克隆 序列分析

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山药PAL基因全长cDNA序列的克隆、表达与分析

王玲平; 向珣; 韦本辉; 李杨瑞; 《核农学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：为了阐明苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4.3.1.5)基因在山药地下块茎酚类物质积累过程中的分子机理,本研究运用普通PCR、RACE和TAIL-PCR技术从大薯(Dioscorea alataL.)’Zixiao’地下块茎中克隆到同一个PAL基因的3个片段,即长度分别为1 145bp、1 151bp和424bp的中间片段、3’端和5’端的cDNA序列;将3段cDNA序列拼接后获得大小为2 376bp的PAL基因全长cDNA序列,该序列含有一个1986bp的最大开放阅读框(ORF),一个28bp的5’端非翻译区,一个362bp含25 nt的Poly(A+)尾的3’端非翻译区,最大ORF可推测编码一个包括PAL酶活性中心的特征序列(GTITASGDLVPLSYIA)在内的661个氨基酸的多肽,分子量为71.974kDa,等电点6.310;大薯地下块茎的PAL基因分别在核苷酸与氨基酸水平上和GenBank中所选已知其他物种的同源性为73%~77%和76%~82%,说明PAL基因在系统进化上相对保守;RT-PCR分析表明该基因仅在地下块茎中表达,而且表达丰度在收获前逐渐降低。

关键词： 大薯 苯丙氨酸解氨酶 全长cDNA 基因克隆 序列分析 时空表达

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甘蔗ACC氧化酶基因的克隆与植物表达载体构建

王爱勤; 韦波; 何龙飞; 杨丽涛; 李杨瑞; 《安徽农业科学 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：[目的]为甘蔗的基因工程育种提供理论基础和技术储备。[方法]从甘蔗嫩叶中提取总RNA,根据GenBank中甘蔗ACC氧化酶cDNA序列设计2对引物,利用RT-PCR技术扩增甘蔗ACO cDNA序列。构建甘蔗ACO cDNA正义植物表达载体和反义植物表达载体,并利用含ACC氧化酶基因的植物重组表达载体转化根癌农杆菌感受态细胞。[结果]从甘蔗嫩叶中提取总RNA的OD260/OD280为1.90,说明提取RNA完整性好、纯度高,完全可满足cDNA逆转录的要求。所获得的甘蔗ACC氧化酶cDNA序列全长为969bp,与GenBank中甘蔗ACOcDNA的核苷酸序列同源性为98.6%,氨基酸序列同源性为97.5%。成功构建了正义植物表达载体pBIaco和反义植物表达载体pBIantiaco,并将其导入根癌农杆菌EHA105中。[结论]该研究为研究该基因的功能和培育甘蔗转基因新种质资源奠定了基础。

关键词： 甘蔗 ACC氧化酶 基因克隆 植物表达载体

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黄皮LEAFY同源基因的克隆与序列分析

何新华; 李杨瑞; 罗聪; 《林业科学 》 2007 北大核心 CSCD

关键词： 黄皮 LEAFY 克隆

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金柑LEAFY同源基因克隆与全序列分析

郭永泽; 张利; 李杨瑞; 《广西农业生物科学 》 2007 CSCD

摘要：通过PCR扩增,从融安金柑基因组DNA中克隆出一条2 361 bp的DNA片段,该DNA克隆含有1个2 081 bp的LEAFY同源基因全长序列(FcLFY)。金柑LEAFY同源基因包含2个内含子和3个外显子,编码398个氨基酸。比对结果表明,金柑LEAFY同源基因与甜橙、枳的LEAFY同源基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为98%。该研究为今后从分子水平上研究金柑开花调控机理打下了坚实的基础。

关键词： 金柑 LEAFY 克隆

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第三轮国家甘蔗区试材料在南宁的表现

何红; 张革民; 闭少玲; 容凤玉; 陈钦祥; 《中国糖料 》 2003

摘要：品种区域试验结果表明,平均产蔗量和含糖量表现较突出的品系为闽糖86-2121、福农91-4710和粤糖92-126,平均产蔗量分别比统一对照(新台糖10号,下同)增产26.04%、25.55%和12.99%;平均含糖量分别比统一对照增产21.16%、18.26%和14.71%。平均蔗糖分较高的是云蔗92-19、粤糖93-159、粤农91-854和粤糖92-126,分别比统一对照提高0.54%、0.42%、0.41%和0.32%。产蔗量和含糖量较高的品系其蔗糖分相对较低,而蔗糖分较高的品系其产蔗量往往较低。

关键词： 甘蔗 区域试验 品系 表现

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甘蔗ACC氧化酶基因片段的克隆与序列分析

李杨瑞; 张树珍; 林俊芳; 郭丽琼; 《遗传学报 》 2003 SCI 北大核心 CSCD

摘要：1 -氨基环丙烷 - 1-羧酸 (ACC)氧化酶是植物乙烯合成的一个关键酶 ,乙烯作为一种内源激素 ,对植物生长、老熟过程有多方面的调节作用。根据报道的各种植物ACC氧化酶氨基酸序列上前后两个保守区设计两个简并引物 ,以甘蔗总DNA为模板 ,通过PCR扩增到一个 940bp的基因片段。将片段序列在NCBI的BLAST软件上进行同源性搜寻 ,显示的 63个序列全部是ACC氧化酶基因 ,因而认为克隆到的片段就是甘蔗ACC氧化酶基因的一个成员。经对不同植物来源的ACC氧化酶基因家族进行比较分析 ,去除一个 10 3bp的“内含子”后 ,推导的氨基酸序列为 2 79个残基 ,占推测全长氨基酸残基总数的 86%左右。经同源性分析 ,序列与毛竹和水稻ACC氧化酶的同源率达到 86%。系统进化分析表明 ,该序列最先与水稻、其次和香蕉的ACC氧化酶聚类 ,然后再与双子叶植物的ACC氧化酶聚类 ,符合按形态特征分类的血缘关系。基因的获得对下一步了解乙烯的合成表达与甘蔗生长、成熟过程之间的关系奠定了基础

关键词： 1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶 基因克隆 甘蔗

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人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定及植物表达质粒的构建

杨海杰; 张军; 夏宁邵; 陈如凯; 李杨瑞; 《广西大学学报(自然科学版) 》 2002 CSCD

摘要：用 PCR方法合成了人表皮生长因子 ( h EGF)基因 ,构建了原核表达质粒 p2 0 T-h EGF,研究了原核表达的重组蛋白 h EGF的生物学活性 ,并构建了植物表达质粒 .研究表明 :无论是融合蛋白 GST-h EGF或纯化的h EGF蛋白 ,都有相当高的生物活性 ,h EGF蛋白对 Hela细胞的增殖有很好的促进作用 ,免疫小鼠亦能产生很高的免疫应答反应 .

关键词： 人表皮生长因子(hEGF) 基因克隆 原核表达

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大肠杆菌海藻糖磷酸合酶基因的克隆

张树珍; 李杨瑞; 《广西农业生物科学 》 2002 CSCD

摘要：根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水平上 ,该 ORF与已报道的 ots A基因具有 99.86%的同源性。在氨基酸水平上 ,其推断性的编码产物蛋白与 Ots A具有 1 0 0 %一致性

关键词： 大肠杆菌 海藻糖6磷酸合酶基因 克隆

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