科研产出
产普鲁兰酶克雷伯氏菌的分离鉴定及酶学性质研究
《广西科学 》 2013
摘要：利用曲里苯蓝法从淀粉加工厂废水氧化池酸性污泥样品中筛选普鲁兰酶产生菌,对筛选到的GXAS-38菌株进行形态观察、生理生化特征分析、16SrDNA序列系统发育分析和普鲁兰酶酶学性质研究,并用PCR方法克隆GXAS-38菌株的普鲁兰酶基因。结果表明,GXAS-38菌株属于肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),其产普鲁兰酶的最适反应温度为60℃,在温度35～50℃时酶活较稳定;最适反应pH值5.5,在pH值5.0～7.5时酶活较稳定。Ca2+、Na+和Li+对GXAS-38菌株的普鲁兰酶活性有激活作用;Cu2+、Zn2+、Co2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+和Ba2+对GXAS-38菌株的普鲁兰酶活性有抑制作用;螯合剂EDTA能够强烈地抑制GXAS-38菌株的普鲁兰酶活性,GXAS-38菌株的普鲁兰酶反应需要金属离子参与。GXAS-38菌株完整的普鲁兰酶编码基因全长3291bp,编码1096个氨基酸。
关键词： 普鲁兰酶 肺炎克雷伯氏菌 分离 鉴定 酶学性质 基因克隆
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金线莲菌根真菌的分离和鉴定
《环球中医药 》 2013
摘要：目的 分离及鉴定野生金线莲根内菌根真菌.方法 采用平皿点种法进行金线莲菌根真菌的分离,提取菌株的总DNA,采用丝状真菌ITS通用引物对其rDNA相应区段进行PCR扩增,产物经纯化后测序.结果 结合各菌株的形态特征和ITS区域基因序列特征,将A12菌株、5号菌株、2号菌株、6号菌株、A46菌株和A55菌株鉴定为丝核菌(Rhizoctonia sp.),其有性态为Thanatephorus sp.或Ceratobasidium sp..结论 通过对金线莲菌根真菌的分离鉴定,有望将其应用到金线莲及兰科其它濒危药用植物繁殖中去.
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类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化
《南方农业学报 》 2012 CSCD
摘要：【目的】探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持。【方法】将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质。【结果】类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6%,纯化倍数为13.4倍。纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58kDa。将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用LineweaverBurk作图法,测得其Km=3.3×10-5mol/L。薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD。【结论】纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值。
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番木瓜幼叶原生质体分离研究
《南方农业学报 》 2011 CSCD
摘要：【目的】探讨番木瓜幼叶原生质体的最佳分离条件。【方法】以20～30日龄番木瓜无菌苗幼叶为材料,对原生质体分离过程中酶液组合、酶解时间、纯化离心速度(500～1500rpm)及离心时间(6～10min)进行探讨。【结果】随着酶解液中纤维素酶和果胶酶含量的提高,番木瓜原生质体产量逐渐升高,而其活力逐渐降低,其中以为2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶组合的效果较好,解离时间以8h为宜。随着酶解液中甘露醇浓度的升高,原生质体的产量呈现先增加后降低的趋势,在0.55mol/L时达到最大(2.48×106个/gFW)。在悬浮纯化原生质体时,以1000rpm离心6～8min的效果较好。【结论】适宜原生质体分离的酶解液为2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+25mmol/LMES+0.55mol/L甘露醇,最适酶解时间为8h;在原生质体纯化时,使用1000rpm离心6~8min,有利于获得产量及活力较高的原生质体。
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酿酒葡萄‘桂葡1号’幼叶原生质体分离研究
《中国农学通报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：研究酿酒葡萄‘桂葡1号’幼叶原生质体的最佳分离条件。以‘桂葡1号’20~30日龄无菌苗幼叶为分离原生质体试材,对分离过程中酶液组合、酶解时间、稳定剂浓度、纯化时离心速度及离心时间进行比较分析。酶组合以2%纤维素酶+0.5%果胶酶为宜。随着酶解时间的延长,原生质体的产量逐渐增高,适合‘桂葡1号’幼叶原生质体的酶解时间以8h为宜。在0.45~0.55 mol/L的甘露醇范围内,随浓度提高,原生质的产率明显上升,0.55 mol/L时达到最大2.48×106个/(g·FW),活力为79.78%。在悬浮纯化原生质体时,以1000 r/min离心6~8min的效果较好。分离材料的适宜酶液组合为2% Celluasw Onozuka R-10+0.5% PectolyaseY-23+25 mmol/L MES+0.55 mol/L甘露醇,解离时间以8h为宜。悬浮纯化时,蔗糖浓度以30%、1000 r/min离心6~8 min效果较好。
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一种简易分离藻类的方法(英文)
《Agricultural Science & Technology 》 2010
摘要：[目的]改进藻类分离方法。[方法]采自天然淡水水体,水样经孔径大小合适的细胞筛过滤,除去浮游动物、浮游植物,得到天然培养液。该培养液的成分未变,适合藻类生长。用显微镜观察并估计水样中藻类密度(假如其密度过大,则可以用蒸馏水适当稀释),取适量水样接种到天然培养液中,用通气膜将瓶口封好,进行预培养。取微量经预培养的藻液,接种于藻类通用培养液中,进行再培养,直至分离出藻类。[结果]采用此方法从南宁一小型淡水水体中分离出12类藻(均粗分到属),其中蓝藻门5类(色球藻、微囊藻、蓝纤维藻、鱼腥藻、螺旋藻)、硅藻门1类(辐节藻)、绿藻门6类(衣藻、弓形藻、多芒藻、小球藻、纤维藻、栅列藻)。[结论]此法中所用的天然培养液,其营养成分没改变,更有利于藻类的生长。与传统的稀释法相比,采用液体培养液直接培养分离,操作更简便,有利于运动性强藻类的分离。此法的不足之处在于分离结果缺乏直观性。
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两株高丁醇耐受细菌的分离鉴定及其丁醇耐受特性的研究
《生物技术通报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：高浓度丁醇耐受菌株是丁醇异源重组生产的关键因素。本研究对不同环境中耐受丁醇的微生物进行筛选,从自然环境中分离得到两株能够耐受高浓度丁醇的菌株,分别命名为btpz-4-1和btpz-6-3,它们耐受丁醇的浓度达到了25g/L。通过分子标记物16S rDNA的鉴定以及分子系统进化树的分析,btpz-4-1被鉴定为Lactobacillus mucosae,btpz-6-3被鉴定为Pedi-ococcus pentosaceus。同时,对它们的生理特性进行研究,结果显示btpz-4-1和btpz-6-3的最适生长温度分别为45℃和42℃,最适生长pH分别为6.0和6.5。
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一种高效分离荔枝霜疫霉病菌的新方法
《植物保护 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：作者将常规植物病原菌组织分离法改进成一种适合于荔枝霜疫霉病菌分离的简便、高效的新方法。分离的荔枝果实经过100μg/mL多菌灵及36μg/mL链霉素的混合药液浸泡处理,在无菌保湿的条件下采用病果对健果进行病害诱发后进行病原菌的分离纯化。该新方法分离荔枝霜疫霉病菌的成功几率大于传统组织分离法。
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