您好，欢迎访问广西农业科学院 机构知识库！

甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD 基因的克隆、原核表达及纯化

文献类型： 会议论文

第一作者： Zhang Kunkun

作者： Zhang Kunkun 1 ; 张琨琨 1 ; Shao Min 1 ; 邵敏 1 ; Wu Chaoxing 2 ; 吴朝兴 3 ;

作者机构： 1.广西大学农学院,广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530004

2.中国农业科学院甘蔗研究中心,广西农业科学 院农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室,广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁,530007

3.广西大学农学

关键词： 甘蔗;固氮菌;基因克隆;原核表达;蛋白纯化

会议名称： 广西甘蔗学会第十届代表大会暨2015年学术交流会

主办单位： 广西甘蔗学会

页码： 00000001-00000520

摘要： 基于NCBI数据库中固氮菌nifD基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX120E nifD基因的ORF;以pET30a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒pET30a-nifD.将正确的重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3),在28℃培养条件下经1mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-ply-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况.结果表明,本研究克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD基因的ORF为1452bp,编码483个氨基酸;原核诱导表达后经提纯和质谱鉴定,该蛋白等电点为5.90,分子量为53.87kD,与预期大小一致.该蛋白在原核表达系统中以包涵体的形式成功表达.利用Ni柱亲和层析方法进一步获得了纯度较高的重组蛋白,为今后单克隆抗体的制备、蛋白质印记杂交检测(Western Bloting)等研究奠定了基础.

分类号： S566.101

  • 相关文献

[1]甘蔗HSP20基因克隆、原核表达及逆境胁迫响应. 宋奇琦,张小秋,宋修鹏,颜梅新,王泽平,雷敬超,黄冬梅,李秋芳,梁永检. 2022

[2]4株甘蔗固氮菌株活化土壤养分及影响土壤酶活的分析. 谢显秋,张瑞楠,韦江璐,黄毓燕,陈炯宇,李杨瑞,邢永秀. 2024

[3]甘蔗体内具有固氮酶活性细菌的分离、鉴定及其相关特性研究. 杨荣仲,桂意云,李杨瑞,雷新涛,张海林. 2007

[4]甘蔗器官固氮酶活性及其对接种固氮菌的响应. 张新成,李杨瑞,梁俊. 2008

[5]钼对甘蔗体内固氮菌的固氮酶活性的影响. 李杨瑞,杨丽涛. 2007

[6]固氮菌接种对不同甘蔗品种NPK积累的影响. XING Yong-xiu,邢永秀,MO Yao,莫遥,LUO Li-jing,罗丽静,LIU Ling,刘灵,WEI Chun-yan,魏春燕,YANG Li-tao,杨丽涛. 2015

[7]广西甘蔗内生固氮菌资源及其应用的相关基础研究. 杨丽涛,胡春锦,林丽,邢永秀,罗霆,魏春燕,李杨瑞. 2015

[8]接种固氮菌Klebsiella sp.120对甘蔗光合特性和主要矿质营养元素含量的影响. XING Yong-xiu,邢永秀,MO Yao,莫遥,LUO Li-jing,罗丽静. 2015

[9]龙眼咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(DLCCoAOMT)基因的克隆和表达分析. 陈虎,何新华,罗聪,杨丽涛,张保青,宋修鹏. 2012

[10]人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定及植物表达质粒的构建. 杨海杰,张军,夏宁邵,陈如凯,李杨瑞. 2002

[11]干燥和复吸水条件下发菜过氧化物氧还蛋白差异表达与基因克隆. 焦广飞,周有文,游向荣,张亚萍. 2011

[12]甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSB的克隆及原核表达. 秦翠鲜,陈忠良,桂意云,李双喜,汪淼,廖青,李杨瑞. 2013

[13]甘蔗类异黄酮还原酶(IRL)基因的克隆与表达分析. 张小秋,邵敏,朱惠,杨丽涛,李杨瑞. 2014

[14]甘蔗GA20氧化酶基因片段克隆及序列分析. 李杨瑞,王爱勤,杨丽涛,杨柳. 2009

[15]甘蔗NADP异柠檬酸脱氢酶基因(SoNADP-IDH)的克隆与表达分析. 杨丽涛,王盛,张小秋,李杨瑞. 2015

[16]甘蔗烟酰胺转氨酶基因(SoNAAT1)的克隆及其在缺Fe胁迫下表达量变化. 李长宁,Mukesh Kumar Malviya,苏琴,张艳,陈艳露,覃丽萍,谢玲. 2018

[17]甘蔗赤霉素氧化酶基因ScGA20ox1的克隆及功能分析. 周慧文,丘立杭,黄杏,李强,陈荣发,范业赓,罗含敏,闫海锋,翁梦苓,周忠凤,吴建明. 2022

[18]甘蔗抗坏血酸过氧化物酶基因ScAPX1的克隆和表达分析. 张保青,邵敏,黄玉新,黄杏,宋修鹏,陈虎,王盛,谭秦亮,杨丽涛,李杨瑞. 2019

[19]甘蔗ScHAK10基因克隆及表达分析. 罗海斌,蒋胜理,黄诚梅,曹辉庆,邓智年,吴凯朝,徐林,陆珍,魏源文. 2018

[20]甘蔗苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的克隆和表达分析. 黄杏,莫凤连,田丹丹,杨丽涛,李杨瑞,陈保善. 2013

作者其他论文 更多>>
置顶
购物车
反馈

© 京ICP备09089781号-29 主办单位：广西农业科学院

学术资源： 中国农业科学院 农业专业知识服务系统 农科联盟资源共建共享平台 中国农业科技文献与信息服务平台 中国农业期刊集成服务平台