科研产出
芒果MiRab11基因及突变体的原核表达分析
《热带作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为研究芒果MiRab11蛋白的互作及其它生物学功能,本文在MiRab11基因序列基础上,采用重叠PCR定点突变技术,获得了2个结构域突变体Mi-Rab11CA和Mi-Rab11DN,将其构建原核表达载体,并成功转化大肠杆菌BL21。SDS-PAGE结果显示,在28℃条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导4 h,可获得大量可溶性蛋白的表达。将可溶性蛋白经Ni-NTA argrose层析柱纯化并western blot鉴定,该重组蛋白均可与抗His单克隆抗体发生特异性免疫反应。本研究为深入研究芒果pET-Rab11蛋白生理活性、特异性结合位点及功能调控打下良好基础。
关键词： 芒果 MiRab11 突变体蛋白 原核表达 纯化 鉴定
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类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化
《南方农业学报 》 2012 CSCD
摘要：【目的】探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持。【方法】将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质。【结果】类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6%,纯化倍数为13.4倍。纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58kDa。将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用LineweaverBurk作图法,测得其Km=3.3×10-5mol/L。薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD。【结论】纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值。
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一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选、纯化及酶学性质
《应用与环境生物学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：从南宁酒厂附近土壤中筛选到一株产淀粉酶的野生菌株GXBA-4,经革兰氏染色、芽孢染色以及16SrDNA鉴定,初步确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien).将该菌株发酵液经过硫酸铵沉淀和凝胶过滤纯化出一种α-淀粉酶,该酶相对分子质量约为57×103;反应最适温度为40~45℃,适应温度范围广,30℃时仍具有80%以上的相对活力;最适pH为5.0,为低温酸性淀粉酶.该酶水解可溶性淀粉的产物,经HPLC检测主要是以葡萄糖,麦芽糖以及麦芽三糖为主的低聚糖,分别以α-环糊精、β-环糊精、可溶性淀粉、玉米生淀粉为底物,还原糖产物比为0:0:99:3.4,表明该酶为典型的α-淀粉酶.
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重组甘蔗1-氨基环丙烷-1-羧基(ACC)氧化酶的纯化及其特性
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在IPTG诱导下,重组甘蔗(Sacharum sinensis)1-氨基环丙烷-1-羧基(ACC)氧化酶在体外以包涵体蛋白形式表达。包涵体蛋白经Ni2+-NTA金属螯合层析柱纯化和复性后,获得酶活力高达132.58nmolC2H4/mg/h蛋白。该蛋白在pH5.5~8.0和20~45℃温度范围内比较稳定,最适pH6.7,最适温度33℃;米氏常数(Km)61.77μmol/L,酶动力学参数(Vm)值0.9647μmol/min,被一定浓度的CO2和底物ACC所激活,受Mg2+、Cu2+、Zn2+和EDTA抑制。
关键词： 甘蔗 重组1-氨基环丙烷-1-羧基(ACC)氧化酶 Ni2+-NTA金属螯合层析柱 纯化 特性
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木豆种子酸性磷酸酯酶AcPase I的部分纯化和动力学特性
《广西农业科学 》 2007
摘要：以萌发的木豆种子为材料,经过匀浆、硫酸铵分部(20%~60%饱和度)沉淀、DEAE-Sephadex A25离子交换与凝胶柱层析,可得到两个酶活力峰AcPase I和AcPase。将AcPase I过HA和ConA-Sepharose 4B柱层析后,被纯化了51.3倍,比活性为10.80U/mg。AcPase I经PAGE和SDS-PAGE分析都呈现单一蛋白酶带,证明Ac-Pase I是单亚基蛋白酶,其亚基分子量约为32kDa。以对硝基苯磷酸作底物时,AcPase I最适pH为4.0,最适温度为50℃,Km为2.48mmol/L,专一性常数为1.47U/mM.mg,AcPase I对焦磷酸有最小的米氏常数0.15mmol/L,有最大的专一性常数74.63 U/mM.mg。因此,AcPase I的这些动力学特性可为今后进一步研究提供理论依据。
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重组甘蔗ACC氧化酶cDNA原核表达的纯化复性研究
《广西农业生物科学 》 2006 CSCD
摘要：重组甘蔗ACC氧化酶基因在大肠杆菌中表达,其产物以不溶性包涵体存在。用N i2+-NTA亲和层析柱对其进行纯化,结果显示,在层析柱上直接复性及纯化的方法比在变性条件下N i2+-NTA纯化然后稀释透析进行复性的方法简捷,效果好,获得的目的蛋白质纯度大于98%,活性为132.58 nm o l C2H4/(m g.h)。
关键词： 重组甘蔗ACC氧化酶 融合蛋白 包涵体 Ni2+-NTA 纯化 复性
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