科研产出
基于非理性设计的肺炎克雷伯氏杆菌甘油脱水酶的分子定向进化
《基因组学与应用生物学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：1,3-丙二醇是一种具有广泛应用前景和巨大市场潜力的平台化合物。在生物体转化甘油合成1,3-丙二醇的代谢途径中,甘油脱水酶是代谢途径的限速酶,然而自然界中的甘油脱水酶却存在着诸多的不足。本研究采用易错PCR技术对来源于肺炎克雷伯氏杆菌的甘油脱水酶进行非理性设计的分子定向进化,通过高通量筛选方法筛选获得了一个酶学性质得到了改善的突变酶γ-F97G。当以甘油作为酶催化的底物时,突变酶的酶比活力为(583.8±49.4)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约94%;当以1,2-丙二醇作为酶催化底物时,突变酶的酶比活力为(147.9±5.5)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约72%。经分析酶蛋白的三维结构后发现酶蛋白发生突变的位点属于远距离突变位点,实验结果表明远距离突变有时同样是一条优化和改善酶的酶学性质的好途径。
关键词： 肺炎克雷伯氏杆菌 1 3-丙二醇 甘油脱水酶 分子定向进化
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Bacillius naganoensis普鲁兰酶基因的分子改造及酶学性质研究
《生物技术 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的:通过缺失原酶上氨基酸残基,提高普鲁兰酶的酶活,并对其突变体重组酶进行酶学特性研究。方法:以Bacillius naganoensis基因组DNA为模板,PCR扩增大小为2 781 bp的普鲁兰酶编码基因,并通过PCR方法缺失原酶上的前78个氨基酸残基,获得突变体PulA234,将编码基因酶切连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)。IPTG诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE和酶学特性研究。结果:突变体发酵液的酶活是原酶的19倍,SDS-PAGE电泳结果显示有明显特异性条带,分子质量约为100 kDa。该突变酶的最适反应温度为60℃,最适pH为4.75,在pH 3.8~6.6范围内活性稳定,Cu2+、Ca2+对酶活有激活作用。结论:经改造的重组酶酶活力有所提高,具有良好的pH和酸稳定性,为普鲁兰酶酶制剂工业化生产及应用奠定基础。
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芒果MiRab11基因及突变体的原核表达分析
《热带作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为研究芒果MiRab11蛋白的互作及其它生物学功能,本文在MiRab11基因序列基础上,采用重叠PCR定点突变技术,获得了2个结构域突变体Mi-Rab11CA和Mi-Rab11DN,将其构建原核表达载体,并成功转化大肠杆菌BL21。SDS-PAGE结果显示,在28℃条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导4 h,可获得大量可溶性蛋白的表达。将可溶性蛋白经Ni-NTA argrose层析柱纯化并western blot鉴定,该重组蛋白均可与抗His单克隆抗体发生特异性免疫反应。本研究为深入研究芒果pET-Rab11蛋白生理活性、特异性结合位点及功能调控打下良好基础。
关键词： 芒果 MiRab11 突变体蛋白 原核表达 纯化 鉴定
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温泉土壤宏基因组文库构建及普鲁兰酶筛选
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】构建温泉土壤宏基因组文库并进行普鲁兰酶活性筛选,以期获得高活力、耐高温的新型普鲁兰酶基因。【方法】采用间接法提取温泉土壤样品中宏基因组DNA,经SephadexG200(含2%PVPP)凝胶柱和电洗脱两步纯化后,扩增16SrRNA序列,通过序列比对和系统发育进化树分析温泉土壤微生物的多样性;然后以pCC1FOS为载体构建温泉土壤宏基因组文库,并对所获得的宏基因组文库进行活性筛选。【结果】利用宏基因组技术提取温泉土壤样品中微生物的基因组DNA,构建了一个约含1146个克隆的温泉土壤16S rRNA文库,经遗传进化分析,发现温泉土壤样品中的大部分微生物未被研究过,主要来源于厚壁菌门(Firmicutes),其次为恐球菌—栖热菌门(Deinococcus-Thermus)和变形杆菌门(Proteobacteria)。用提取获得的宏基因组DNA成功构建了温泉土壤微生物宏基因组Fosmid文库,文库约含2.7万个克隆,平均插入片段长度为40.0 kb,文库外源DNA总容量为1.2×109bp;通过活性筛选共获得9个可表达普鲁兰酶活性的克隆。【结论】宏基因组文库技术是获取极端环境微生物新酶的有效手段,可为进一步挖掘普鲁兰酶的应用潜力及研究其耐热机理奠定基础。
关键词： 普鲁兰酶 宏基因组 16S rRNA DNA文库 温泉土壤
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超声波处理对不同基因型水稻产量形成的影响
《华北农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以常规稻(中花11和华航31)、二系杂交稻(Y58S/1589和P88S/1589)和三系杂交稻(深优9586和湘丰优103)为试验材料,在大田条件下,研究了超声波处理对不同基因型水稻产量及其构成因子、光合特性以及物质积累与分配的影响。试验设超声波和对照2种处理方法,采用单本移栽,株行距规格为20 cm×20 cm。试验每处理设置3次重复,各小区面积为42 m2,按当地高产栽培措施进行管理。测定剑叶净光合速率、叶面积指数、叶片SPAD值、干物质量和产量等指标。结果表明:超声波处理提高了不同基因型水稻的地上部干物质积累总量、净光合速率、叶绿素含量和叶面积指数;显著提高了不同基因型水稻的物质输出率和转化率、干物质净积累量和群体生长率。最终表现为超声波处理提高了不同基因型水稻产量,其中华航31、Y58S/1589、深优9586和湘丰优103均达显著水平。
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2013年广西桂中北稻作区晚稻中熟组区域试验报告
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】2013年在广西桂中北稻作区开展晚稻中熟组区域试验,筛选出适宜在该稻作区种植的水稻新品种。【方法】分别以T78优2155、五优308为对照,对参加2013年广西桂中北稻作区晚稻中熟组区试的水稻新品种11个(H两优1712、中百优2155、乐优1067、五优255、全优915、德优108、恒丰优2155、惠两优116、航两优705、香丰优26、龙两优1439)进行生育期、产量及其构成因素、抗性表现和品质等鉴定。【结果】除H两优1712生育期偏长外(107.5 d),大部分参试水稻品种表现为熟期适中,为103.3~105.5d,与T78优2155(CK1)相差0~3d。H两优1712、德优108、恒丰优2155、惠两优116和龙两优1439产量分别为7120.5、6931.5、6937.5、7162.5和6865.5kg/ha,均高于两个对照。H两优1712中感稻瘟病,优于对照;德优108、恒丰优2155、惠两优116和龙两优1439感稻瘟病,与对照相当。惠两优116和龙两优1439中感白叶枯病,优于对照;H两优1712、德优108和恒丰优2155感~高感白叶枯病,与对照相当。5个品种H两优1712、德优108、恒丰优2155、惠两优116和龙两优1439的产量、米质和抗性等综合性状均优于对照,而五优225、航两优705、香丰优263个品种的产量、米质和抗性等综合性状比对照差。【结论】H两优1712、德优108两个品种可推荐省级评审;恒丰优2155、惠两优116、龙两优1439按试验程序继续参加2014年区域试验及生产试验,五优225、航两优705、香丰优26终止试验。
关键词： 水稻新品种 中熟组 区域试验 桂中北稻作区 综合性状
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耕作和施氮方式对广西沿海地区红麻农艺性状和产量的影响
《南方农业学报 》 2014 CSCD
摘要：【目的】探讨红麻对不同耕作和施氮方式的响应,为红麻高产高效栽培提供合理的耕作和施肥依据。【方法】通过二因素三水平大田试验,研究耕作和施氮方式对红优2号生麻产量与农艺性状的影响。设3种耕作方式,A:免耕,B:垄耕,C:深松耕(深度30 cm);3种N肥施氮方式,T1:20%作基肥、80%作为追肥,T2:40%作基肥、60%作为追肥,T3:60%作基肥、40%作为追肥,共9个处理组合。【结果】免耕时,AT1处理组合的红麻株高、茎粗、皮厚等农艺性状及生麻产量、种子产量、地上部干重等产量性状均达最大值;垄耕和深松耕时,BT3和CT3处理组合的株高、茎粗、皮厚等农艺性状及生麻产量、种子产量、地上部干重等产量性状均达最大值;与免耕相比,深松耕的生麻产量、种子产量和地上部干重分别增加26.5%、19.1%和21.1%,差异显著(P<0.05)。【结论】深松耕组合40%作为追肥;生麻产量和地上部干重均达到最大值;深松耕组合60%作追肥,种子产量达到最大值。
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壳寡糖对干旱胁迫下甘蔗叶片生理指标的影响
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探讨干旱胁迫下壳寡糖对甘蔗生理指标的影响,明确壳寡糖的抗旱作用机制,为壳寡糖在作物抗旱中的应用提供参考依据。【方法】以台糖22号(ROC22)为材料,设正常供水(CK)、干旱处理、干旱胁迫条件下甘蔗叶片喷施100 mg/L壳寡糖溶液3个处理,在喷施壳寡糖后第2、4、6和8 d采集叶片样品,测定甘蔗叶片内肽酶、丙二醛(MDA)、可溶性糖、叶绿素荧光参数等。【结果】在正常供水条件下,甘蔗叶片内肽酶活性、MDA、可溶性糖含量、Fv/Fm和电子传递量子产量(ΦPSⅡ)、相对水分含量(RWC)均保持在一定水平,无明显变化。随着干旱胁迫时间的延长,干旱处理及喷施壳寡糖处理的甘蔗叶片内肽酶活性、MDA和可溶性糖含量呈上升的变化趋势,而干旱处理叶片Fv/Fm和电子传递量子产量(ΦPSⅡ)、RWC及壳寡糖处理的RWC呈不断下降的变化趋势。壳寡糖处理后第2~8 d的甘蔗叶片内肽酶活性不同程度高于干旱处理,而干旱处理第4~8 d的叶片MDA含量不同程度高于壳寡糖处理。经壳寡糖处理后第2~6 d叶片可溶性糖和RWC均稍低于干旱处理,但在第8 d显著高于干旱处理,分别为28.1 mg/g和66.7%。喷施壳寡糖处理后的叶片Fv/Fm和ΦPSⅡ呈不断增加的趋势,并在第8 d显著高于干旱胁迫处理,分别为干旱胁迫组的1.28和1.58倍。【结论】干旱胁迫下,外施壳寡糖可协调甘蔗叶片的生理代谢过程,改善甘蔗叶片对干旱胁迫的适应性,增强甘蔗的抗旱能力。
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樱桃番茄新品种引种试验
《种子 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为优良新品种樱桃番茄在兴义的适应性和生产栽培提供一定的依据。本试验以乐乐、美娜、绿果、黑珍珠、金圣为试材,对其生育期、田间表现、产量、品质等进行了分析比较。结果表明:美娜生育期最短,为93 d,生长势最强,适应性最好,产量也高(为4894.2 kg/667 m2),颜色粉红,口感脆甜,是目前最适合兴义露地和设施栽培的新品种;绿果、黑珍珠产量高,产量分别为7358.2 kg/667 m2、5733.2 kg/667 m2,长势强,适应性较强,颜色特别,但露地种植雨季偶有裂果,是设施栽培的最佳新品种;乐乐、金圣适应性较强,口感甜脆,颜色大众,产量较低,但硬度大,耐贮运,适宜长途运输外销。
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红麻6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PDGH)基因克隆及RNAi载体构建
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆红麻不育系和保持系6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PDGH)基因,并构建其RNAi载体,为进一步研究其在红麻花药发育中的功能奠定基础。【方法】根据红麻花药转录组高通量测序数据结果和生物信息学方法获得6PDGH基因全长c DNA拼接序列,分别以红麻不育系(P3A)和保持系(P3B)的花药反转录c DNA及总DNA为模板克隆红麻6PGDH基因全长。依据RNAi载体设计原则,选取红麻6PGDH基因c DNA序列中段389 bp的特异片段做为RNA干扰片段,构建红麻6PGDH基因的RNAi载体。【结果】克隆获得的红麻不育系(P3A)和保持系(P3B)花药6PGDH基因全长均为1751 bp,均包含1458 bp的开放阅读框,编码485个氨基酸残基,无内含子;其碱基序列在不育系和保持系中仅存在两个碱基差异。该基因氨基酸序列(Gen Bank登录号KF964027)与拟南芥、玉米、大豆、苜蓿、三角叶杨、蓖麻的6PDGH同源性分别为75.07%、84.57%、86.50%、87.24%、91.19%和92.01%。成功构建了红麻6PGDH基因的RNAi载体,获得了干扰表达载体p ART27-p KANNIBAL-R1+2。【结论】成功克隆获得红麻6PGDH基因全长序列,构建的干扰表达载体可用于红麻6PGDH基因的功能研究。
关键词： 红麻花药 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 基因克隆 载体构建
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