科研产出
根癌农杆菌介导荸荠秆枯病菌转化体系构建及突变体筛选
《西南农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]建立农杆菌介导荸荠秆枯病菌(Cylindrosporium eleocharidis)的遗传转化体系,构建该病菌的突变体库并进行突变体筛选,为荸荠秆枯病病原菌的分子机理研究提供参考依据.[方法]运用农杆菌介导的真菌转化方法,将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体pEX4转化至荸荠秆枯病菌野生型菌株Ceh中,利用PCR、Southern blotting杂交和荧光显微镜检测等技术验证转化子.通过单因子变量[共培养基中的乙酰丁香酮(AS)、农杆菌诱导时间、病原菌孢子浓度、IM诱导培养基pH、共培养时间和共培养介质]试验,优化农杆菌遗传转化体系,并建立该病菌突变体库,分析突变体的形态变异和致病性.[结果]获得的最佳遗传转化条件为:共培养基中AS浓度为300μmol/L,农杆菌诱导时间6 h,真菌孢子浓度为10~7个/mL,诱导培养基pH 5.6,共培养时间72 h,共培养介质为硝酸纤维素膜.在该优化条件下,农杆菌遗传转化体系转化效率达600~700个转化子/10~7个孢子.随机挑取转化子进行PCR检测均为阳性,T-DNA单拷贝插入率达77.8%,荧光显微镜均可检测到荧光信号.[结论]成功构建了农杆菌介导的荸荠秆枯病病原菌遗传转化体系和T-DNA插入突变体库,并筛选获得表型和致病性缺陷突变体,可用于指导荸荠秆枯病菌基因功能和病菌与寄主互作研究.
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桂糖甘蔗新品系黑穗病抗性鉴定及结果分析
《热带作物学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：防治甘蔗黑穗病最有效的途径是种植抗病品种,而评价甘蔗抗黑穗病是抗病品种选育过程中重要程序。本研究对广西农科院甘蔗研究所选育的8个桂糖甘蔗新品系进行人工浸渍接种甘蔗鞭黑粉菌混合冬孢子悬浮液,同时调查大田自然发病情况,收集一新一宿黑穗病发病情况。ROC22号为对照品种,综合评价桂糖甘蔗新品系对黑穗病的抗性。结果表明:抗性类型为抗病的品系有2个,分别为桂糖12-765和桂糖12-2262。抗性类型为中抗的品系有2个,分别为桂糖12-2476和桂糖12-2004。抗性类型为中感的品系有1个,为桂糖12-162。抗性类型为感病的品系有3个,分别为桂糖12-762、桂糖12-2425和桂糖12-917。对照品种ROC22的综合抗性类型为感病。对比人工接种和自然发病结果,人工接种黑穗病更准确评价甘蔗品种抗黑穗病的水平,为选育高产高糖高抗黑穗病甘蔗品种提供依据。
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沃柑黄龙病亚洲种Nested-PCR检测与调查分析
《南方农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探究沃柑感染黄龙病的田间症状表现及各症状与感染黄龙病的相关性,为种植者尽早鉴别黄龙病树和及时做好黄龙病防控工作提供参考依据。【方法】从广西不同地区沃柑果园采集沃柑黄龙病疑似样品,对样品按症状分类并记录,用试剂盒法提取叶脉和果柱基因组DNA,采用黄龙病亚洲种的16S r DNA特异引物f D1/fD2和OI1/OI2进行巢式PCR(Nested-PCR)扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计不同症状样品的阳性率。【结果】收集的214份黄龙病疑似样品中,不同症状样品均检出黄龙病亚洲种病原菌,检出阳性率表现为典型红鼻子果=斑驳黄化叶>果蒂稍红果>均匀黄化叶>叶脉黄化叶>僵果>缺锌黄化叶>其他黄化叶>正常叶。各症状类型与感染黄龙病均存在相关性,但存在差异,其中,典型红鼻子果和斑驳黄化叶阳性率均为100.0%,与感染黄龙病相关性最大;其次果蒂稍红果阳性率为90.9%,与感染黄龙病相关性很大;夏、秋梢均匀黄化叶阳性率为46.5%,与感染黄龙病相关性大。沃柑感染黄龙病后症状复杂,大多出现两种以上复合症状,结果树最初症状为出现果蒂稍红果,落果较多,未结果树以夏、秋梢黄化居多,根系容易受损;正常叶阳性率达16.7%,说明沃柑感染黄龙病早期不易显症。【结论】沃柑出现典型红鼻子果和斑驳黄化叶,可田间诊断为黄龙病树;出现果蒂稍红果,并严重落果,基本可田间诊断为黄龙病树;夏、秋梢均匀黄化黄龙病检出率高,但确诊还需与其他疑似症状(叶脉黄化叶、僵果、缺锌黄化叶、其他黄化叶和正常叶)一样通过PCR进一步检测。Nested-PCR检测技术灵敏性高,可作为沃柑感染黄龙病的早期鉴定技术。
关键词： 沃柑 黄龙病病原 Nested-PCR检测 调查分析
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红壤地区直播油菜施硼对籽粒产量和品质的影响
《土壤学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：红壤地区是我国重要的油菜种植区,研究直播冬油菜硼肥施用效果,为直播油菜科学施硼提供理论依据,对促进区域油菜产业发展有重要意义.2017-2018年在江西、湖南、湖北南部和广西北部油菜主产区布置7个硼肥大田试验,设置不施硼、施硼肥(含硼量100 g·kg–1)4.5 kg·hm–2、9.0 kg·hm–2、13.5 kg·hm–2四个处理.结果表明,红壤地区土壤有效硼普遍含量低,直播油菜施硼增产效果显著,油菜籽平均产量和施硼经济效益在硼肥用量9.0kg·hm–2时最高,与不施硼相比增产1 021 kg·hm–2,增产率达110.6%,分别较施用硼肥4.5 kg·hm–2和13.5 kg·hm–2增产16.6%和3.1%.施硼显著增加直播油菜收获密度、单株角果数和每角粒数,进而增加了油菜产量;同时硼肥的施用可显著提高油菜籽的含油率、油酸和亚油酸含量,与不施硼相比,施用硼肥9.0 kg·hm–2处理各品质指标分别增加26.9%、45.9%和72.6%,相应增加产油量136.1%.在硼肥用量13.5 kg·hm–2范围内,油菜地上部硼含量和硼累积量随着施硼量的增加而增加,但硼肥利用率呈现降低的趋势,硼肥用量为9.0 kg·hm–2处理的硼肥当季利用率也仅为9.4%.综合结果显示,红壤地区直播油菜施硼增产增收效果显著,直播油菜生产中应重视硼肥的合理施用,区域硼肥的推荐用量为9.0 kg·hm–2左右.
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超声协同复合酶法提取番茄红素及体外模拟消化对抗氧化活性的影响
《南方农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]优化圣女果番茄红素提取工艺,并分析其抗氧化活性,为提高圣女果番茄红素的开发利用提供理论依据.[方法]在单因素试验基础上,通过响应面法优化圣女果番茄红素超声协同复合酶提取最佳工艺条件,并考察经人工胃液和肠液体外模拟消化后番茄红素清除1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH·)能力的变化情况.[结果]各因素对圣女果番茄红素提取量的影响排序为超声时间>酶解温度>复合酶添加量>料液比.3个单因素(复合酶添加量、酶解温度和超声时间)及料液比与复合酶添加量、料液比与超声时间、复合酶添加量与酶解温度、酶解温度与超声时间的交互作用对圣女果番茄红素提取量影响极显著(P<0.01).圣女果番茄红素最优提取工艺条件为:料液比1:40、复合酶添加量3.6%、酶解温度54℃、超声时间22 min,在此工艺条件下,圣女果番茄红素的提取量为410.94±1.78μg/g,与模型预测值(412.62μg/g)接近.圣女果番茄红素对DPPH·、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O-2·)的清除能力具有一定的量效关系,均明显高于同浓度的2,6-二叔丁基对甲酚(BHT).体外模拟消化后的圣女果番茄红素对DPPH·的清除率减小,且圣女果番茄红素浓度越高,清除率降幅越小.[结论]采用响应面法优化的工艺条件可用于圣女果番茄红素提取,且提取得到的圣女果番茄红素具有较强的抗氧化能力,可为后续圣女果的开发利用提供技术支持.
关键词： 番茄红素 超声波 复合酶 抗氧化活性 模拟肠胃道消化
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水稻锌指蛋白基因CRISPR/Cas9突变体的构建及突变分析
《南方农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻锌指蛋白基因(OsC3H54)进行基因编辑,筛选鉴定出其突变体植株,为深入研究OsC3H54的生物学功能提供良好材料,也为水稻锌指蛋白研究提供参考依据.[方法]通过E-CRISP在OsC3H54基因的外显子上设计靶点序列,将靶点序列连接至OsU6SK载体上,再与Cas9一起连接到pCAM-BIA1300双元载体上,获得CRISPR/Cas9重组双元载体,通过农杆菌介导将其转入日本晴水稻愈伤组织,利用潮霉素进行抗性筛选,获得突变体植株,并分析其靶点位置的碱基及编码氨基酸突变情况.[结果]在OsC3H54基因第2个外显子上找到2个符合靶点设计要求的靶点,分别为TG1:5'-CCGCCGCGGCTGCCTTTGGATAC-3'和TG2:5'-CCTTCCC CAATGGCGGGGGTGGC-3'.将OsU6SK载体和靶点序列正确连接的重组载体与Cas9一起连接至pCAMBIA1300双载体上,成功获得CRISPR/Cas9重组双元载体(pCAMBIA1300-Cas9-TG1和pCAMBIA1300-Cas9-TG2).通过农杆菌介导转入日本晴水稻,经潮霉素抗性筛选获得TG1靶点株系和TG2靶点株系,共16株CRISPR/Cas9突变体植株.CRISPR/Cas9突变体植株在靶点序列的突变位点位置附近出现套峰,表明2个株系的植株均发生碱基突变,其中Y1、Y2、Y3和Y4突变体植株均为单碱基插入突变,最终导致编码的氨基酸发生移码突变,蛋白翻译提前终止.[结论]水稻OsC3H54基因CRISPR/Cas9突变体植株的获得为进一步研究水稻锌指蛋白生物学功能提供了良好材料.
关键词： 水稻 锌指蛋白 C3H54 CRISPR/Cas9 基因编辑 突变体植株 突变分析
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辣椒脉斑驳病毒病研究进展
《园艺学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：辣椒脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus,ChiVMV)于1979年在马来半岛的辣椒上被首次报道,现已蔓延至世界各地.在中国,ChiVMV自2003年在陕西出现以来,已在四川、湖南、贵州等辣椒主产区大面积发生,成为严重危害辣椒生产的主要病害之一.本文中重点对ChiVMV危害症状、传播以及株系分化、基因组结构及功能、辣椒抗性鉴定、遗传以及分子标记定位等方面研究进行综述,以期为抗病育种工作提供理论参考.
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甘蔗赤霉素合成基因ScGA3ox的克隆和表达分析
《植物生理学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：以'新台糖22号'甘蔗为材料,利用RACE (rapid amplification of cDNA ends)技术克隆了赤霉素(GA)重要合成基因ScGA3ox 1 137 bp的ORF全长序列.生物信息学分析表明, ScGA3ox的分子量为41.158 kDa,是不稳定亲水性蛋白,与玉米ZmGA3ox1和水稻OsGA3ox具有相同的motif组成结构和较近的进化关系; ScGA3ox没有明显的跨膜结构,分别存在15个丝氨酸和14个苏氨酸磷酸化位点.实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分析表明, 200mg·L-1 GA3处理后的48 h内, ScGA3ox在茎和幼叶中的表达量持续升高; 200 mg·L-1 PP333处理对ScGA3ox在根、茎和叶中的表达均具有显著的促进作用; 0°C低温处理后的24 h内, ScGA3ox在甘蔗根和叶中的表达量均明显升高; 200 mg·L-1的PEG6000处理后的48 h中, ScGA3ox在根中的表达量逐渐下降,在茎中的表达量逐渐升高.说明ScGA3ox除了在GA信号通路中发挥作用外,还可能参与甘蔗对外界非生物逆境的应答过程.
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基于ISSR标记的卡特兰种质资源遗传多样性分析
《西南农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]分析卡特兰属(Cattleya)植物的遗传多样性并评价其亲缘关系,为卡特兰的品种鉴别、分类、遗传图谱构建及分子育种打下基础.[方法]采用ISSR分子标记技术,从100条ISSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性高、重复性好的引物对18份卡特兰种质资源进行PCR扩增,并利用GenAlEx 6.51计算各种间的遗传多样性参数;采用NTSYS 2.1的非加权算术平均聚类(UPGMA)法进行聚类分析.[结果]利用筛选出的6条引物对供试材料进行PCR扩增获得153条谱带,多态性条带比率达100%;遗传多样性参数中,平均观测等位基因数(Na)为2.000个,平均有效等位基因数(Ne)为1.207个,平均Nei's遗传多样性指数(He)为0.157,平均Shannon信息多样性指数(I)为0.281;卡特兰种质资源间的遗传相似系数在0.6514 ~0.8991;UPGMA聚类分析结果表明,在相似系数0.749处,可将18份卡特兰种质资源划分为6个类群.[结论]卡特兰种质资源间具有丰富的遗传多样性;UPGMA聚类分析结果与传统的形态学分类结果基本一致,18份卡特兰种质资源分别隶属于卡特亚属、波浪边亚属、类匈伯加亚属、镰刀形花亚属、因特美地亚属、藕茎花亚属和圈聚花兰属7个属.
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二次正交旋转组合设计优化桂糖42号栽培因子
《西南农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]优化桂糖42号甘蔗的种植密度和施肥水平,明确其高产综合配套栽培模式,为该品种在生产上进一步推广种植提供参考依据.[方法]采用五元二次正交旋转组合设计,建立产量与下种量、氮磷钾施肥量和行距的二次多项式回归模型,分析桂糖42号的高产优化方案.[结果]以设计编码和桂糖42号甘蔗产量建立二次多项式回归模型得到的回归方程拟合较好,说明该回归方程可较好地反映产量与栽培因子间的关系.试验因子效应分析结果表明,种植行距和下种量对桂糖42号产量贡献较大,其次是氮肥和钾肥水平,磷肥水平的贡献较小;在试验设计的水平范围内,甘蔗产量随种植行距的增大而降低,在低水平时随下种量和施肥量的增加而提高,在高水平时随下种量和施肥量的增加而降低.边际效应及栽培方案优化分析结果表明,以90.00 t/hm~2为目标产量的桂糖42号优化栽培方案为:下种量120 525~122 025芽/hm~2,施用氮肥364.0~380.0 kg/hm~2、磷肥164.0~179.0 kg/hm~2、钾肥244.0~256.0 kg/hm~2,种植行距0.8~0.9 m;获得最佳经济效益时对应的优化方案为:下种量112 500芽/hm~2,施用氮肥360.0 kg/hm~2、磷肥180.0 kg/hm~2、钾肥270.0 kg/hm~2,种植行距1.2 m.[结论]在中等土壤肥力条件下,桂糖42号在下种量112 500芽/hm~2、种植行距1.2 m及氮、磷、钾肥施用量分别为360.0、180.0和270.0 kg/hm~2时可获得较佳的经济效益.
关键词： 桂糖42号 二次正交旋转组合设计 栽培因子优化 产量
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