科研产出
一株酸性糖化酶的分离纯化及酶学性质研究
《现代食品科技 》 2012
摘要：从土壤中筛选得到一株产酸性糖化酶的黑曲霉ASP-S21,粗酶液通过(NH4)2SO4沉淀、Sepharose HP阴离子交换层析、Sephacryl S-200层析柱分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量为120 kDa。该酶最适作用温度为65℃;酶的最适反应pH值为4.0;在pH 2.2~7.6之间,具有较好的酸稳定性;酶的Km值为0.94 mg/mL,Vmax=142.43 mol(Glu)/min.L。Cu2+和Co2+对酶活有较强的促进作用,10 mM的Cu2+使酶活力提高到129%,Fe3+对酶催化活力抑制作用较强。该酶且具有部分降解生淀粉的能力,在pH 4.0,50℃反应1h,生淀粉酶活力为0.39 U,RDA值为4.57%。得到的黑曲霉ASP-S21酸性糖化酶,产生的糖化酶活力高、耐酸稳定性好,酶学性质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,具有良好的研究前景。
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生化腐植酸的提取和分析
《安徽农业科学 》 2012 北大核心
摘要：[目的]优化发酵液中生化腐植酸(BHA)的提取工艺条件,并对其进行分析。[方法]运用单因素试验和正交试验优化BHA提取工艺;通过液相色谱、E4/E6、紫外-可见光谱、红外光谱对其进行定性、定量、芳香化程度、分子量、官能团种类及含量分析。[结果]最佳提取工艺条件为:提取液成分6 mol/L NaOH+0.025 mol/L Na4P2O7、提取液加入量17.5 ml、提取温度26℃、提取时间3 h,酸化pH为1.5,提取BHA量较优化前提高了29.17%;生化腐植酸和商品腐植酸结构相似,但BHA官能团种类较多、比例较高、分子量较小、芳香化程度较低。[结论]优化后的提取工艺合理可行,可用于提取生化腐植酸;试验所用4种分析方法简便快速,为生化腐植酸的结构研究、质量控制提供了依据。
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一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选、纯化及酶学性质
《应用与环境生物学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：从南宁酒厂附近土壤中筛选到一株产淀粉酶的野生菌株GXBA-4,经革兰氏染色、芽孢染色以及16SrDNA鉴定,初步确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien).将该菌株发酵液经过硫酸铵沉淀和凝胶过滤纯化出一种α-淀粉酶,该酶相对分子质量约为57×103;反应最适温度为40~45℃,适应温度范围广,30℃时仍具有80%以上的相对活力;最适pH为5.0,为低温酸性淀粉酶.该酶水解可溶性淀粉的产物,经HPLC检测主要是以葡萄糖,麦芽糖以及麦芽三糖为主的低聚糖,分别以α-环糊精、β-环糊精、可溶性淀粉、玉米生淀粉为底物,还原糖产物比为0:0:99:3.4,表明该酶为典型的α-淀粉酶.
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大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立(英文)
《南方农业学报 》 2011 CSCD
摘要：【目的】建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序,为其深入研究奠定基础。【方法】以大果油茶嫩叶片为供试材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。【结果】提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1.8～2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足ISSR-PCR扩增要求。在25.0μLISSR-PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为:40ng/μL模板DNA1.0μL、2.5mmol/LdNTPs2.0μL、5U/μLTaqDNA聚合酶0.2μL、10μmol/L引物1.0μL、10×PCR Buffer2.5μL(含有Mg2+),加ddH2O至25.0μL。PCR反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性40s,52℃和53℃退火40s,72℃延伸90s,40个循环;最后72℃延伸7min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。【结论】建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性。
关键词： 大果油茶 基因组DNA 提取 ISSR反应体系 建立
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枯草芽孢杆菌B47菌株抗菌物质的分离纯化及其对玉米小斑病的防治作用
《中国生物防治学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株B47为番茄内生细菌,能产生对多种植物病原菌有抑制作用的抗菌物质。通过盐酸沉淀、甲醇抽提、硅胶柱层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)法提取和纯化到该抗菌物质。理化性质测定结果表明,该物质热稳定性和抗紫外线稳定性好;在碱条件下稳定;对蛋白酶不敏感;能溶于甲醇;双缩脲反应呈阳性,茚三酮反应呈阴性,但经酸水解后茚三酮反应呈阳性,推测该物质可能为环肽类物质。该物质对测试的14种病原真菌有拮抗作用,其中,对玉米大小斑病菌和各种香蕉叶斑病菌的拮抗作用强,但对供试病原细菌无拮抗作用。该抗菌物质在0.3g.L-1浓度下对玉米小斑病的田间防治效果为53.05%。
关键词： 枯草芽孢杆菌 抗菌物质 分离纯化 抗菌谱 防治效果
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天然蔗蜡脂产物的超声波辅助提取与分析
《西南农业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：采用混合溶剂热回流提取法和超声波辅助提取法,研究不同比例浓度的混合溶剂、超声波频率、萃取时间对甘蔗皮渣中蔗蜡脂产率的影响。结果显示,70%乙醇含量的乙醇-汽油混合溶剂可作为最适提取溶剂,在45 KHZ频率的超声波下萃取4 h,蔗蜡脂产率可达最高值7.0%,纯化蔗蜡产率可达4.6%;蔗蜡脂产物经皂化、柱层析纯化后,气相色谱-质谱(GC-MS)定性定量分析其纯度达70.45%,主要成分为C22~C30的偶碳脂肪醇类和植物甾醇衍生物,单组分成分最高为C28脂肪醇,含量为50.34%,植物甾醇主要是麦角甾醇和豆甾醇的衍生物,含量分别为4.72%和1.12%。试验研究为甘蔗高附加值产物蔗蜡脂的提取制备提供了一种新的方法。
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生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质
《生物加工过程 》 2010 CSCD
摘要：分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。
关键词： Paenibacillus sp. 生淀粉酶 分离纯化
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高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究
《生物技术通报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物。目前,甘蔗分子生物学研究已成为甘蔗研究的热点之一。基因组DNA的提取是进行甘蔗分子生物学研究的基础。本研究设计含一系列SDS浓度的提取液,同时设加液氮和不加液氮研磨的对比试验,提取甘蔗不同部位叶片的基因组DNA并进行产量和纯度检测以及分子生物学分析。结果表明,所有提取液提取的甘蔗基因组DNA纯度均很高,A260/A280在1.8-2.0之间,A260/A230大于2,但提取液I(0.75%SDS)提取的甘蔗基因组DNA产量较低;加液氮与否对甘蔗基因组DNA的提取产量和纯度没有影响;以提取的甘蔗基因组DNA为模板,分别用一对扩增SPS(蔗糖磷酸合成酶)基因部分片段的引物和一对ISSR引物进行PCR扩增,所有DNA均能扩增出预期的条带;用不同的限制性内切酶对所提取的甘蔗基因组DNA进行酶切,所有DNA样品均能完全酶切。本研究得出最佳甘蔗基因组DNA提取方法如下:磨碎甘蔗叶片后,加DNA提取液(SDS:1.5%;Tris:100 mM;EDTA:20 mM;NaCl:500 mM)于65℃裂解30 min,经酚∶氯仿和氯仿各抽提一次,可获得高产量高质量的甘蔗基因组DNA,能满足后续分子生物学研究的要求。
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