科研产出
重组甘蔗1-氨基环丙烷-1-羧基(ACC)氧化酶的纯化及其特性
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在IPTG诱导下,重组甘蔗(Sacharum sinensis)1-氨基环丙烷-1-羧基(ACC)氧化酶在体外以包涵体蛋白形式表达。包涵体蛋白经Ni2+-NTA金属螯合层析柱纯化和复性后,获得酶活力高达132.58nmolC2H4/mg/h蛋白。该蛋白在pH5.5~8.0和20~45℃温度范围内比较稳定,最适pH6.7,最适温度33℃;米氏常数(Km)61.77μmol/L,酶动力学参数(Vm)值0.9647μmol/min,被一定浓度的CO2和底物ACC所激活,受Mg2+、Cu2+、Zn2+和EDTA抑制。
关键词： 甘蔗 重组1-氨基环丙烷-1-羧基(ACC)氧化酶 Ni2+-NTA金属螯合层析柱 纯化 特性
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荸荠基因组DNA的提取及RAPD反应体系的建立(英文)
《广西农业科学 》 2009
摘要：以荸荠叶状茎为试验材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其RAPD反应体系进行优化,建立了荸荠的RAPD-PCR优化反应体系和程序。结果表明,提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1.8～2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足RAPD-PCR扩增要求。建立了荸荠RAPD反应体系:总体积为25μl,各有关成分的最佳浓度分别为25mmol/L Mg2+,1.0U Taq DNA聚合酶,0.2mmol/L dNTPs,1μmol/μl引物,1.5ng/μl DNA模板。PCR反应程序为:94℃预变性3min;94℃变性1min,37℃退火30s,72℃延伸60s,40个循环;最后72℃延伸10min。
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铁皮石斛原球茎多糖DCPP3c-1的分离纯化及结构初步分析
《分析测试学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)依次层析,分离纯化得灰色多糖DCPP3 c-1。其纯度经比旋光度法、柱层析、紫外扫描检测,组分和结构经薄层层析、高效液相色谱、红外光谱及高碘酸钠氧化等试验分析。结果显示DCPP3 c-1为均一组分,相对分子质量为72.4 ku,由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其分子物质的量之比为1.120 4∶1∶1.046∶23.354∶3.828∶1.046,分子中1→6残基占14%,1→2或1→4残基占40.7%,1→3键占45.3%。红外光谱显示其具有多糖特征吸收峰,并存在α-吡喃糖苷键。DCPP3 c-1是首次从液体悬浮培养的原球茎中分离得到的新型酸性杂多糖组分。
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木豆种子酸性磷酸酯酶AcPase I的部分纯化和动力学特性
《广西农业科学 》 2007
摘要：以萌发的木豆种子为材料,经过匀浆、硫酸铵分部(20%~60%饱和度)沉淀、DEAE-Sephadex A25离子交换与凝胶柱层析,可得到两个酶活力峰AcPase I和AcPase。将AcPase I过HA和ConA-Sepharose 4B柱层析后,被纯化了51.3倍,比活性为10.80U/mg。AcPase I经PAGE和SDS-PAGE分析都呈现单一蛋白酶带,证明Ac-Pase I是单亚基蛋白酶,其亚基分子量约为32kDa。以对硝基苯磷酸作底物时,AcPase I最适pH为4.0,最适温度为50℃,Km为2.48mmol/L,专一性常数为1.47U/mM.mg,AcPase I对焦磷酸有最小的米氏常数0.15mmol/L,有最大的专一性常数74.63 U/mM.mg。因此,AcPase I的这些动力学特性可为今后进一步研究提供理论依据。
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重组甘蔗ACC氧化酶cDNA原核表达的纯化复性研究
《广西农业生物科学 》 2006 CSCD
摘要：重组甘蔗ACC氧化酶基因在大肠杆菌中表达,其产物以不溶性包涵体存在。用N i2+-NTA亲和层析柱对其进行纯化,结果显示,在层析柱上直接复性及纯化的方法比在变性条件下N i2+-NTA纯化然后稀释透析进行复性的方法简捷,效果好,获得的目的蛋白质纯度大于98%,活性为132.58 nm o l C2H4/(m g.h)。
关键词： 重组甘蔗ACC氧化酶 融合蛋白 包涵体 Ni2+-NTA 纯化 复性
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罗汉果叶病毒(WMV―2―Luo)抗血清制备及ELISA检测技术研究
《西南农业学报 》 2001 CSCD
摘要：用西葫芦作为罗汉果花叶病毒(WMV－2－Luo)的繁殖寄主,通过差速离心和PEG二次沉淀法得到WMV－2－Luo的提纯液,用该病毒提纯液免疫日本大白兔,获得了WMV－2－Luo兔抗血清.经ELISA测定,其效价为1/5 120,以0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8,含1.5％NaDIECA)作为样品制备缓冲液,用间接ELISA法检测WMV－2－Luo的灵敏度为1/3 200.用此方法检测罗汉果组培苗带毒情况和田间株均获得成功.
关键词： 罗汉果花叶病毒 提纯 抗血清制备 间接ELISA法
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罗汉果花叶病毒(WMV-2-Luo)抗血清制备及ELISA检测技术研究
《西南农业学报 》 2001 CSCD
摘要：用西葫芦作为罗汉果花叶病毒 (WMV 2 Luo)的繁殖寄主 ,通过差速离心和PEG二次沉淀法得到WMV 2 Luo的提纯液 ,用该病毒提纯液免疫日本大白兔 ,获得了WMV 2 Luo兔抗血清。经ELISA测定 ,其效价为 1/5 12 0 ,以 0 1mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7 8,含 1 5 %NaDIECA)作为样品制备缓冲液 ,用间接ELISA法检测WMV 2 Luo的灵敏度为 1/32 0 0。用此方法检测罗汉果组培苗带毒情况和田间病株均获得成功。
关键词： 罗汉果花叶病毒(WMV-2-Luo) 提纯 抗血清制备 间接ELISA法
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