科研产出
适用于双向电泳的芒果叶片蛋白提取方法的建立
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为建立一套适用于鉴别"四季芒"成花蛋白表达差异的双向电泳方法,摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以"四季芒"芒果叶片为材料,采用TCA-丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等3种芒果叶片蛋白提取方法,进行SDSPAGE和双向电泳,比较这些方法的提取效果。结果表明,改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高TCA-丙酮法蛋白提取质量。提取液p H能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、2-DE凝胶蛋白点数量和分布。p H 8.5提取液所提蛋白获得最多的2-DE蛋白点,但在小分子区域蛋白分辨率比p H9.0提取液所提蛋白低。TCA-丙酮法所提蛋白在大分子区域2-DE蛋白点分辨率不如改良酚抽提乙酸铵沉淀法,但小分子和高等电点区蛋白点分辨率却明显好于后者。实验表明改良酚抽提乙酸铵沉淀法和TCA-丙酮法有很强的互补性,可以在双向电泳体系中组成双提取法提高蛋白分辨率。
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果胶酶和纤维素酶对芒果出汁率及品质的影响
《食品工业科技 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为提高芒果的出汁率,采用果胶酶和纤维素酶对芒果浆进行酶解,通过正交实验研究了果胶酶添加量、纤维素酶添加量、酶解温度、酶解时间4个因素对芒果出汁率的影响。结果表明:当果胶酶添加量为0.01%、纤维素酶添加量为0.007%、酶解时间为60min、酶解温度为40℃时,芒果的出汁率最高,达到71.15%;酶解得到的芒果汁可溶性固形物为16.7%±0.1%,可滴定酸为0.51%±0.08%,类胡萝卜素为(1.23±0.07)mg/100g,还原糖为7.6%±0.08%,果胶含量为(357±1.32)mg/100g,保留了鲜芒果的营养成分。
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杧果Rab蛋白基因MiRab11的克隆及表达分析
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：根据前期对杧果(Mangifera indica L.)胁迫差异分析中获得的Rab11片段,采用RT-PCR结合RACE技术,从‘四季杧’混合组织材料(叶、茎、花和果实)中克隆了一个Rab11完整编码区序列,命名为MiRab11。其cDNA全长902 bp,包含完整开放阅读框657 bp,编码218个氨基酸。同源性分析表明MiRab11与葡萄和柑橘的同源性最高(相似度均为97%)。实时荧光定量检测结果表明:MiRab11在杧果叶、茎、花和果实中均有表达,在嫩茎和花后70 d的成熟果实中的表达较高;在果实形成及发育初期表达量略有下调,但在果实成熟过程中表达量明显上调;逆境胁迫(低温、盐、干旱)处理可引起在叶或茎中上调表达;不同信号物质(脱落酸、水杨酸、双氧水)刺激均可引起叶中的表达上调。结果表明,MiRab11可能在杧果果实成熟和胁迫反应中发挥重要作用。
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芒果类黄酮磺基转移酶基因克隆及表达分析
《热带作物学报 》 2014 CSCD
摘要：利用前期芒果逆境差异显示的基因数据设计引物,从四季芒基因组DNA和cDNA中克隆了1条长为1208 bp的基因片段。生物信息学分析发现,该基因属于类黄酮磺基转移酶(flavonoid sulfotransferase)基因,在第71-334个氨基酸中包含一个保守的Sulfotransferase结构域,命名为芒果类黄酮磺基转移酶基因(MiST)。该基因编码341个氨基酸,分子量为85.14 ku,等电点为5.09,不含内含子,在不同芒果品种之间其核苷酸和氨基酸序列均高度保守。半定量表达模式分析显示,该基因在四季芒茎、叶、花和果中均有表达,但在谢花后20 d的小果和谢花后40 d的中果中的表达量较高,表明该基因可能与芒果果实中黄酮的生物合成有关。
关键词： 芒果 类黄酮磺基转移酶基因 表达分析
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芒果MiRab11基因及突变体的原核表达分析
《热带作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为研究芒果MiRab11蛋白的互作及其它生物学功能,本文在MiRab11基因序列基础上,采用重叠PCR定点突变技术,获得了2个结构域突变体Mi-Rab11CA和Mi-Rab11DN,将其构建原核表达载体,并成功转化大肠杆菌BL21。SDS-PAGE结果显示,在28℃条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导4 h,可获得大量可溶性蛋白的表达。将可溶性蛋白经Ni-NTA argrose层析柱纯化并western blot鉴定,该重组蛋白均可与抗His单克隆抗体发生特异性免疫反应。本研究为深入研究芒果pET-Rab11蛋白生理活性、特异性结合位点及功能调控打下良好基础。
关键词： 芒果 MiRab11 突变体蛋白 原核表达 纯化 鉴定
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杧果低分子量热激蛋白基因MiHSP17.6的克隆及表达分析
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR与RACE相结合的方法获得了杧果低分子量热激蛋白基因的c DNA全长序列,命名为Mi HSP17.6,Gen Bank登录号为KJ459857。序列分析显示,该基因序列全长为680 bp,其中开放阅读框为462 bp,编码154个氨基酸,5′非编码区和3′非编码区长度分别为80 bp和135 bp。杧果Mi HSP17.6与其他物种的低分子量热激蛋白同源性介于74%~82%。实时荧光定量分析表明,Mi HSP17.6在‘四季杧’不同组织器官中均表达,在果实发育的中期表达水平持续上升。高温(44℃)、低温(4℃)、盐(Na Cl)、聚乙二醇(PEG)、脱落酸(ABA)、双氧水(H2O2)和水杨酸(SA)处理均诱导该基因表达,因此推测Mi HSP17.6的功能可能与杧果果实发育和抵御逆境胁迫相关。
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HPLC法同时测定不同种类芒果中10种有机酸的研究
《食品科技 》 2014 北大核心
摘要：有机酸不仅决定芒果风味及其加工产品品质,并且在产品抑菌抗氧化、延长货架期方面发挥了很大的作用,研究测定芒果中有机酸含量的快速方法有重大的意义。采用HPLC法同时测定8种广西大宗种植芒果品种中10种有机酸含量,采用Hypersil ODS-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为27℃,以0.01 mol/L NH4H2PO4-H3PO4缓冲溶液(pH=2.9)为流动相,在流速为1 mL/min,进样量为10μL,紫外检测器波长为210 nm条件下测定。经过方法精密度及加标回收率实验验证,该方法准确性及精密度高、重现性好,适用于芒果有机酸含量测定,同时得出有机酸含量最高的是苹果酸和柠檬酸,其次是α-酮戊二酸、酒石酸、奎宁酸、抗坏血酸、草酸,含量最少的是琥珀酸、没食子酸、富马酸。
关键词： 芒果 高效液相色谱(HPLC) 有机酸
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ISSR分子标记对杧果实生苗父本的早期鉴定
《南方农业学报 》 2014 CSCD
摘要：【目的】采用ISSR分子标记技术对杧果实生苗进行亲本早期鉴定,为提高杧果育种效率提供参考。【方法】采用ISSR分子标记技术,筛选不同引物鉴定97-1实生苗的父本。【结果】采用优化的ISSR反应体系,从18条引物中筛选获得4条特异引物UBC-848、UBC-857、UBC-864和UBC-868,其扩增条带多、稳定性强、多态性高、背景清晰。利用引物UBC-848、UBC-857、UBC-864、UBC-868分别对四川红杧、紫花杧和97-1实生苗进行扩增,获得的扩增片段长度在100~2000 bp,四川红杧与97-1实生苗、紫花杧与97-1实生苗的共有特异性条带约为180和380 bp、280和380 bp、180和680 bp、680和770 bp。【结论】采用ISSR分子标记技术和引物UBC-848、UBC-857、UBC-864、UBC-868构建了杧果实生苗亲本鉴定体系,可鉴定出97-1实生苗的父本为四川红杧,97-1实生苗是紫花杧和四川红杧的杂交种。
关键词： 杧果 紫花杧 四川红杧 97-1实生苗 亲本早期鉴定 ISSR标记
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