科研产出
杧果SC-SSR分子标记反应体系的建立与优化
《农业研究与应用 》 2021
摘要：采用正交设计方法,对影响PCR反应体系的5个因素（Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物和模板DNA）进行了优化,建立了适用于杧果的SC-SSR-PCR反应体系。结果表明,总反应体系25μL中,包含模板DNA用量100 ng·mL-1、Mg2+浓度2.00 mmol·L-1、引物浓度0.40μmol·L-1、 Taq DNA聚合酶浓度1.00 U、 dNTPs浓度0.15 mmol·L-1。利用优化的杧果SC-SSR-PCR反应体系对10对SC-SSR引物进行验证,均能扩增出清晰、明亮、特异的电泳条带。因此,优化的杧果SC-SSR-PCR反应体系适用于杧果种质鉴定和亲缘关系分析。
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素馨属植物ISSR-PCR反应体系的建立和优化
《江苏农业科学 》 2020 北大核心
摘要：为了确定素馨属植物ISSR-PCR反应的最佳体系,以素馨属植物叶片为材料,采用单因素试验和正交试验设计2种方法对影响素馨属ISSR-PCR反应中的dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA以及Mg2+5个因素进行4个水平的优化试验,通过试验建立了素馨属25μL最佳反应体系:dNTPs浓度为0.10 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量2.5 U、引物浓度为0.7μmol/L、模板DNA用量为2.5 ng、Mg2+浓度为1.0 mmol/L.在最佳反应体系下,从100条ISSR引物中筛选出了8条ISSR引物,并确定了各引物的最佳退火温度.利用29份素馨属材料进行最佳反应体系的验证,结果表明,该优化体系扩增条带清晰,稳定性高,重复性好,表明该反应体系适用于素馨属植物ISSR分子标记的研究.本研究可为素馨属植物遗传多样性以及亲缘关系等方面的研究提供参考依据.
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利用正交设计优化茄子的SRAP体系
《农业研究与应用 》 2017
摘要：以Solanum melongena自交系01为试验材料,利用正交设计L16(45)在5因素4水平上对茄子SRAP反应体系稳定性的Mg~(2+)、d NTPs、引物、Taq酶及模板DNA等外部条件进行了优化试验,并对所稳定的体系进行验证。得出最佳的体系的引物的浓度为0.4 mmol/L、d NTPs的浓度为0.2 mmol/L、Mg~(2+)浓度为2.0 mmol/L、模板DNA为40 ng、Taq酶浓度为0.25U/μL。
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拳卷地钱基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增体系优化
《时珍国医国药 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的建立一种拳卷地钱基因组DNA的提取方法;对影响拳卷地钱ISSR-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系。方法采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平的正交设计对拳卷地钱ISSR-PCR反应体系进行优化。结果采用改进的CTAB法提取的拳卷地钱基因组DNA质量高,且适用于ISSR-PCR扩增;获得拳卷地钱最佳反应体系(20μl)为:Taq酶0.5 U,Mg2+2.0 mmol/L,dNTP 250μmol/L,模板DNA 50ng,引物0.6μmol/L。结论建立并优化了拳卷地钱总DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系。
关键词： 拳卷地钱 DNA提取 ISSR-PCR 正交设计 体系优化
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割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化
《南方农业学报 》 2013 CSCD
摘要：【目的】建立和优化割手密AFLP分子标记技术体系,为割手密遗传多样性分析、遗传图谱构建提供技术支持。【方法】以广西割手密GXS87-16、GXS85-30、GXS79-9、GXS96、GXS112、GXS212为材料,利用改良SDS法提取DNA,并用EcoRⅠ和MseⅠ酶切,连接接头后,采用正交试验设计对影响预扩增反应和选择性扩增反应的主要成分如Mg2+、模板DNA、引物、dNTP、Taq聚合酶浓度进行优化。【结果】样品DNA用限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ各3U于PCR仪过夜可完全酶切。经正交设计优化,较佳的预扩增体系包含0.4μLdNTPs(20mmol/mL),1.6μLMg2+(25mmol/mL),2.0μLEcoRⅠ-P(5pmol/mL),2.0μLMseⅠ-P(5pmol/mL),1UTaq酶(1U/μL),DNA模板稀释10倍;选择性扩增体系包含0.4μLdNTPs(20mmol/mL),0.8μLMg2+(25mmol/mL),1.0μLEcoRⅠ-AAG(6pmol/mL),1.0μLMseⅠ-CAG(6pmol/mL),3UTaq酶(1U/μL),DNA模板稀释20倍。以对优化反应体系扩增获得的PCR产物用5%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后,可获得清晰的多态性指纹图谱。【结论】建立的割手密AFLP分子标记技术体系具有扩增条带清晰、多态性丰富的特点,可为构建割手密高密度遗传图谱提供技术支持。
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不同施肥处理对黑皮冬瓜产量的影响
《北方园艺 》 2012 北大核心
摘要：采用3因素5水平3次重复正交实验设计,研究了氮肥、磷肥和钾肥对"桂蔬一号"黑皮冬瓜产量的影响。结果表明:影响"桂蔬一号"黑皮冬瓜产量的各因素和交互作用的主次顺序为K>N>N×K交互作用>P×K交互作用>N×P交互作用>P。方差分析结果表明,不同的氮肥、钾肥和氮钾肥交互作用对黑皮冬瓜的产量形成有极显著影响,而磷肥、磷钾肥交互作用对黑皮冬瓜的产量形成达到显著影响。通过对各处理组合间进行差异显著性进行检验,表明A5B1C4处理组合的产量最高,即N 800kg/hm2,P2O5225kg/hm2,K2O 750kg/hm2为最佳组合。
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利用正交设计法对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系的优化研究
《植物研究 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA,发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法;对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs,TaqDNA聚合酶,引物及Mg2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR-PCR反应体系(20μL体系):1×Buffer,75ng DNA模板,dNTPs 250μmol·L-1,Taq酶1.0U,引物0.2μmol·L-1,Mg2+2.5mmo·lL-1,反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸2min,循环40次,72℃延伸10min,4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。
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