科研产出
利用SSR标记鉴定南校969杂交一代种子纯度
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了建立一套便捷、准确、稳定的玉米种子纯度鉴定方法,本研究以南校969玉米杂种一代及其亲本为材料,对20对均匀分布于玉米染色体上的SSR引物进行筛选,SSR引物phi085适合该品种纯度鉴定。对利用幼嫩胚芽和干种子为材料提取DNA的实验效果进行比较,建立了一套利用SSR标记技术简便高效进行玉米杂种一代纯度鉴定的技术体系。研究结果证明,利用玉米幼嫩胚芽和干种子胚提取DNA,通过一对SSR引物扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以方便地进行玉米杂交种纯度鉴定。
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拳卷地钱基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增体系优化
《时珍国医国药 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的建立一种拳卷地钱基因组DNA的提取方法;对影响拳卷地钱ISSR-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系。方法采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平的正交设计对拳卷地钱ISSR-PCR反应体系进行优化。结果采用改进的CTAB法提取的拳卷地钱基因组DNA质量高,且适用于ISSR-PCR扩增;获得拳卷地钱最佳反应体系(20μl)为:Taq酶0.5 U,Mg2+2.0 mmol/L,dNTP 250μmol/L,模板DNA 50ng,引物0.6μmol/L。结论建立并优化了拳卷地钱总DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系。
关键词： 拳卷地钱 DNA提取 ISSR-PCR 正交设计 体系优化
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柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较
《南方农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础.[方法]选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒(快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装)及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1/fD2和01I/012c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测.[结果]快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差.除陕速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原.[结论]快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求.
关键词： 柑橘 黄龙病 试剂盒 CTAB DNA提取 PCR
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适于SSR-PCR的农作物基因组总DNA高通量提取方法的建立(英文)
《南方农业学报 》 2012 CSCD
摘要：【目的】建立一种新的、通用、快速的农作物基因组总DNA提取方法,为应用分子标记技术研究遗传多样性及变异提供方便。【方法】分别从甘蔗、水稻、玉米、花生和大豆5种作物中提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA质量进行检测,然后每种作物分别选取两对SSR引物进行PCR扩增,用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果。【结果】采用该提取方法,不同作物产生的纯DNA在100.0～160.0g/g,提取DNA的A260/A280比率在1.80～1.95。此外,电泳凝胶未出现可见的RNA污染,每个作物基因组DNA单一条带非常清晰,DNA结构完整,质量较高,适用于分子标记的研究。应用SSR分子标记进行PCR扩增,重复性、稳定性好,经琼脂糖凝胶电泳检测,条带清晰且分辨率较高。【结论】建立的DNA提取方法为直接将叶片剪碎后装入EP管中,加入提取缓冲液进行DNA提取,省去了用液氮研磨的过程。与传统的DNA分离方法相比,新建立的DNA提取方法具有高通量、简单、快速、经济效益高等优点。
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不同种质荔枝基因组DNA提取研究
《广西农业科学 》 2009
摘要：针对荔枝体细胞富含多酚、多糖、色素以及蛋白质等次生物质的特点,以荔枝叶片为材料,分别采用CTAB法和SDS法对荔枝野生、半野生和栽培种质的基因组DNA进行提取。结果表明,SDS法提取的荔枝基因组DNA效果稳定,获得DNA的机率为100%,DNA纯度高、质量好,可用于AFLP酶切、连接、预扩增和选择性扩增,并获得清晰、稳定的扩增产物;CTAB法提取的荔枝基因组DNA效果不稳定,DNA浓度较低,易出现多糖等次生物质与DNA共沉淀现象,无法检测出DNA。因此,SDS法可用于不同荔枝种质基因组DNA的提取,进行AFLP、SSR、ISSR分析。
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龙荔基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立与优化
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系(反应总体积20μl):1×Buffer缓冲液(含适量Mg2+),1 UTaqDNA聚合酶,0.20 mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,DNA模板70~80 ng/μl,退火温度53~54℃。
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适宜AFLP分析的龙眼基因组DNA提取方法
《西南农业学报 》 2007 CSCD
摘要：以龙眼“石硖”、“大乌圆”、“大广眼”、“龙荔”叶片为试材,研究了一种适宜AFLP分析的龙眼基因组DNA提取方法,其改良策略是:在细胞核被裂解前先除去多酚类等次生物质,防止多酚类的氧化,细胞裂解后再加入10%的CTAB,进一步除去杂质。此方法不仅适用于嫩叶采样,也适用于老叶采样,所提取的基因组DNA可成功进行AFLP标记分析,为龙眼的分子生物学研究提供了科学依据。
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